ПЛР калу на лямблії

Кишкові лямблії як і багато паразити локалізуються в тонкій кишці людини і є збудниками небезпечного захворювання — лямбліозу. Найчастіше від інвазії найпростішими страждають діти, зараження можуть піддатися навіть новонароджені. Лямблії завдають значної шкоди здоров’ю. Прикріплюючись до стінок кишечника, вони порушують всмоктування корисних речовин, рухову активність м’язів тонкої кишки і наносять механічні пошкодження епітелію дванадцятипалої кишки. Протисти також надають сильне отруйну дію на організм. Самий доступний метод виявлення паразитів — аналіз калу на лямблії.

Симптоматика лямбліозу

Лямблії мешкають в тонкому кишечнику, тому основні симптоми проявляються з боку шлунково-кишкового тракту:

• рідкий стілець, іноді з частинками неперетравленої їжі;
• знижується всмоктування вітамінів і мінералів;
• збільшення розмірів печінки;
• наліт на язиці;
• зниження маси тіла;
• анемія, зумовлена порушенням всмоктування кишечника;
• слабкість внаслідок порушеного всмоктування.

Також лямблії викликають інтоксикацію організму, яка проявляється збільшенням лімфовузлів і аденоїдів. При тривалій інвазії з’являється скрип зубами і нервові тики. Незалежно від тяжкості захворювання проявляється алергічний синдром.

Діагностика захворювання ускладнюється тим, що немає симптому, який однозначно би описував хвороба і міг би послужити причиною для постановки діагнозу.

Два варіанти дослідження на лямбліоз

В лабораторіях пропонують пройти обстеження двома способами: прямим і непрямим.

Прямі методи спрямовані на виявлення яєць (цист) і самих збудників, або проведення аналізу калу на антиген лямблій. Їх виявлення служить безпосереднім доказом наявності лямблій в організмі і підставою для постановки діагнозу і проведення лікування. Подібні аналізи використовуються для контролю ефективності проведеного курсового лікування.

Другий метод — непрямий. Він полягає у виявленні антитіл у крові. Це широко поширений і доступний метод, але досить специфічний. Він використовується для вирішення такого питання, чи треба проводити більш поглиблене дослідження.

Імунологічний аналіз (ІФА) на лямбліоз, який націлений на виявлення антитіл до лямблій в сироватці крові, є високочутливим, але не можна повністю покладатися на його результат для постановки діагнозу. Це пов’язано з тим, що патогенний вплив лямблій ще не є достатньо вивченим медициною. У половини хворих цисти лямблій не виявляються при методі ІФА.

Тому досі здають кал на лямблії, який потім вивчається в умовах лабораторії.

Особливості різних методів

Найбільш поширеними і доступними дослідженнями на наявність цист і самих лямблій є наступні види:

• метод нативного мазка калу;
• мазок з розчином Люголя;
• дослідження фекалій з консервантом Барроуза;
• ПЛР діагностика або полімеразна ланцюгова реакція.

Аналіз калу на цисти вимагає дотримання певних умов та правильного послідовного проведення. Чим швидше каловий матеріал буде доставлений в лабораторію, тим точнішими будуть результати.

У випадку з дітьми це не завжди вдається зробити, тому застосовуються розчини-консерванти на основі фенолу і формальдегіду. Фекалії поміщають у розчин, що дозволяє зберегти їх складу.

Також важливу роль грає, наскільки професійно буде проведена мікроскопія калу. Біологічний матеріал повинен наноситися на скло тонкий, майже прозорим шаром. У товстому шарі цисти лямблій проглядаються дуже погано. Дослідження калу під мікроскопом проводиться відразу після отримання біоматеріалу, так як цисти поза організмом господаря втрачають свою форму, стають менше і чим більше часу проходить, тим складніше їх розглянути.

Здавати кал на наявність цист доведеться не один раз. Це пов’язано з тим, що у лямблій може наступати період, коли вони не виділяють яйця і відповідно вони не виходять з фекаліями кожен день. Період застою може тривати від трьох днів до двох тижнів. У такому випадку лікар може прискорити процес цистовиделения, призначивши противолямблиозние препарати.

ПЛР метод має високу чутливість. Він заснований на виявленні певних генів в ДНК паразита, тобто здатний визначати безпосередньо самих збудників. Спосіб показує позитивний результат у 80% випадків. Але наукові дослідження інформують про те, що метод ПЛР не може бути єдиним для визначення лямбліозу. Обумовлено це тим, що діагностика виявляє антиген лямблій тільки у випадку, якщо в поле зору мікроскопа буде перебувати 10 і більше цист.

Збір біоматеріалу

Щоб визначити цисти і рухомі форми лямблій, випорожнення має бути доставлена в лабораторію протягом 20 хвилин. В іншому випадку вегетативні форми паразита гинуть вже через 30-60 хвилин. Цисти залишаються життєздатними протягом 10 днів. Для дослідження необхідно зібрати останню порцію фекалій бажано рідкої консистенції, з якої буде взято не менше 7 проб.

При підозрі на лямбліоз і негативному результаті першого дослідження доведеться здати аналіз не один раз. Це пов’язано з тим, що відкладення яєць у даного виду паразитів може наступати затишшя на кілька днів. Тому повторне дослідження фекалій проводиться з інтервалом в 3 дні не менше 3-4 разів.

Як правильно підготуватися і проводити дослідження:

• протягом тижня не приймати антибактеріальні і протиглисні препарати;
• напередодні перед проведенням аналізу слід випити проносне засіб;
• дослідження проводять протягом 2-3 годин після збору біоматеріалу або використовують консерванти для збільшення термінів зберігання, розводячи фекалії з консервантом в пропорції 1:3.

Якщо є можливість проведення діагностики на основі полімеразної ланцюгової реакції, то рекомендується провести попередню підготовку.

Як здавати фекалії на ПЛР:

• припинити прийом проносних препаратів;
• не вживати засоби, здатні змінити забарвлення калу, наприклад препарати з високим вмістом заліза;
• придбати в аптеці стерильний контейнер з паличкою;
• не використовувати свою тару;
• при зборі матеріалу не рекомендується торкатися до внутрішньої поверхні контейнера пальцями;
• виключити попадання сечі у фекалії;
• дефекація повинна пройти природним шляхом без штучного стимулювання (клізма);
• контейнер заповнюється не більше чим на 30% призначеної для цього паличкою-лопаткою.

Порушення вищеописаних рекомендацій може призвести до спотворення результату дослідження.