ПЛР на гепатит С

ПЛР — сучасна діагностика гепатиту С

Вірусний гепатит — одне з найбільш «підступних» захворювань печінки. Довгий час протікає безсимптомно, що призводить до хронізації процесу (80%). У більшості випадків закінчується фіброзом печінки, перетікає в цироз або пухлина органу.

Особливого значення набувають методи ранньої діагностики захворювання. Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) дозволяє поставити діагноз вже через кілька днів після інфікування.

Коротко про вірусному гепатиті С

Збудник — РНК містить вірус, що має декілька підтипів. Проникає в організм людини через кров: статевим шляхом, при переливанні крові, ін’єкціях та інших інвазивних медичних маніпуляціях.

Гостра форма хвороби не має значущих симптомів. Іноді відзначається тяжкість у правому підребер’ї, яку більшість пацієнтів не помічають.

Хронічна форма призводить до порушення всіх функцій печінки: інтоксикація, біль у животі, жовтяниця, суглобові болі і багато інших. На цьому етапі процес стає незворотнім.

Часто хронічний гепатит С стає попередником злоякісного переродження тканин печінки.

Суть методу ПЛР

Методом ПЛР визначають вірусну РНК вже через 5 днів після зараження. У цей період імунну відповідь ще не запущений, результати серологічного дослідження будуть негативні, клінічні симптоми повністю відсутні.

Саме ПЛР діагностика дає можливість поставити діагноз на ранній стадії захворювання, коли адекватне лікування значно поліпшує прогноз для хворого. Розрізняють два види ПЛР — якісна і кількісна.

Якісна методика

Виявляє генетичний матеріал вірусу гепатиту С в мінімальній кількості. Результат буває двох видів:

  1. «Виявлено» — позитивна реакція, що означає наявність захворювання у людини.
  2. «Не виявлено» — негативний аналіз, який свідчить про відсутність зараження або наявності вірусу в таких малих кількостях, які не фіксуються даним методом. Це не дає 100% ймовірності того, що вірусного гепатиту С у хворого немає.
За темою:  Зішкріб на ентеробіоз

Для аналізу найчастіше використовують кров, але підходить і слина, сперма, інші біологічні рідини.

Кількісна методика

Це більш складний і дорогий метод, який здійснюється за визначеними показаннями:

  1. Підтвердження діагнозу при позитивної якісної ПЛР та виявленні специфічних антитіл.
  2. При поєднаної вірусної патології (вірус гепатиту С часто «сусідить» з гепатитом В, передається такими ж способами).
  3. Контроль ефективності проведеної терапії. Для цього з’ясовують рівень віремії до лікування, потім на 4, 12, 24 тижні терапії. Якщо на 12 тижні рівень вмісту вірусу не знижується на дві логарифмічні одиниці, значить препарат підібраний неправильно.
  4. Діагностика переходу гострої стадії в хронічну.

В одиниці об’єму досліджуваної рідини (зазвичай в 1 мл) підраховують кількість вірусних одиниць. Результат виражається в МО/мл або кількості копій РНК вірусу в 1 мл.

Він показує інтенсивність вірусного навантаження на організм. Чим більше це значення, тим більша ймовірність передачі вірусу іншим людям. Тяжкість ураження печінки від рівня віремії не залежить. Для цього існують численні так звані печінкові проби.

Підготовка до дослідження

Велика частина хибнонегативних аналізів виникає через недотримання технології проведення аналізу. Щоб уникнути цього, потрібно дотримувати наступні правила:

  1. Повністю виключити попадання у біоматеріал забруднюючих речовин (умови абсолютної стерильності).
  2. Мінімальна концентрація гепарину в крові, який використовується для запобігання згортання або призначається хворому в терапевтичних цілях, впливає на результат ПЛР. Важливо заздалегідь з’ясувати у пацієнта це питання.
  3. Не допускати потрапляння будь-яких речовин з навколишнього середовища, які нейтралізують ферменти в тест-системах ПЛР.

Всі ці вимоги стосуються діяльності лаборантів і лікарів. Пацієнту спеціально готуватися не потрібно. Зазвичай здають кров натще, виключають алкоголь.

За темою:  Норма цукру в крові

Переваги ПЛР

У комплексному обстеженні на гепатит С полімеразна ланцюгова реакція стоїть на першому місці за рахунок цілого ряду переваг:

  1. Безпосереднє виділення збудника з можливістю ідентифікувати його підтип. В інших випадках (серологічні реакції) досліджують реакцію імунної системи на вірус.
  2. Висока специфічність методики. Ймовірність отримання хибнопозитивних або хибнонегативних результатів зведена до мінімуму (в основному бувають при порушенні технології проведення дослідження).
  3. Висока чутливість. Більшість лабораторій та тест-систем забезпечують чутливість не менше 50 МО/мл Існує ультра ПЛР, в якій цей показник 10 МО/мл Це означає, що вірус гепатиту С можна виявити в перші дні інфікування.
  4. Універсальність. Методом ПЛР виявляють відразу кілька збудників гепатитів при їх наявності.

ВАЖЛИВО! Віруси з високою мінливістю генотипу (гепатиту, грипу) «заплутують» імунну систему, що призводить до нечітких показників серологічних аналізів (виявляють специфічні антитіла). Тільки ПЛР дає точну відповідь про присутність генотипу збудника в організмі.

Трактування результатів

ПЛР на гепатит С зазвичай проводиться після серологічних аналізів на антитіла. Найбільші труднощі у пацієнтів викликає трактування кількісного варіанту методу. Спробуємо розібратися в цьому питанні.

Якщо результат представлений в МО/мл, то результати описуються наступним чином (дані наводяться для російського обладнання та тест-систем):

Кількість вірусної РНК Трактування
Не виявлено Норма (при відсутності інших клінічних або лабораторних ознак) або кількість вірусу нижче порога чутливості даного методу
Менше 1,5 х 103 Кількість «нижче лінійного діапазону», що означає наявність збудника в організмі, але без можливості кількісного описи вірусного навантаження
Менше 4 х 106 Вірусна РНК виявлено, віремія низька (прогноз перебігу захворювання сприятливий)
Понад 4 х 106 Вірусна РНК виявлено, віремія висока
Понад 2 х 10 8 Концентрація висока, вище лінійного діапазону, що означає дуже високу вірусне навантаження, яка не описується сучасними вимірювальними приладами (прогноз несприятливий).

У таблиці наведено варіант трактування тільки для одного варіанта російських тест-систем. Кожна лабораторія може використовувати своє обладнання, що дає розбіжність у значеннях. Зазвичай результат видається або з готової розшифровкою, або із зазначення меж нормальних значень.

За темою:  Аналіз крові розшифровка у дітей норма в таблиці

Особливості трактування ПЛР

Від правильної інтерпретації результатів аналізу залежить термін початку лікування, що у випадку з гепатитом С життєво важливо для хворого.

Існують кілька факторів, що впливають на розшифровку результатів аналізу:

  • Якість апаратури та чутливість тест-систем. На сьогоднішній день найбільш поширені Cobas Ampicolor ВГС-Теst і РеалБест РНК ВГС. Їх чутливість не менше 50 МО/мл Це означає, що якщо вірус присутній у меншій концентрації (наприклад, у перші дні інфікування), результат дослідження буде негативний, а захворювання буде прогресувати без лікування. Зовсім недавно з’явилися ультра чутливі діагностичні системи (не менш 10 МЕ/мл). Вони значно підвищують якість діагностики. Вартість такої ПЛР коливається в широких межах — від 1800 до 10 тис. рублів залежно від лабораторії.
  • Остаточний діагноз ставиться тільки після трьох різних досліджень біологічної рідини. Якщо результат негативний три рази, то вірусу гепатиту С в організмі пацієнта немає.
  • Для успішного лікування необхідно не тільки підтвердження факту зараження вірусом, але і визначення його підтипи: 1а, 1в, 2а, 2в, 2с, 3, 4, 5а, 6.
  • Результати оцінюються в двох одиницях виміру: МО/мл та кількість копій РНК/мл Їхні цифри відрізняються рівно в 4 рази, про що потрібно пам’ятати, отримуючи результати аналізу на руки.

Трактування ПЛР реакції на вірусний гепатит С має здійснюватися фахівцями. Лікар розбирається в кількісних показниках і зможе порівняти відповідність лабораторних результатів з клінічною картиною.

Іноді бувають псевдопозитивні або помилково негативні варіанти аналізів, і тільки комплексне обстеження пацієнта дозволяє «не пропустити» це тяжке захворювання печінки.