ПЛР аналіз

Серед сучасних методик лабораторної діагностики ПЛР вважається найбільш достовірним і швидким методом виявлення інфекцій в людському організмі.

Що таке ланцюгова полімеразна реакція і в чому її основні переваги? Які типи інфекцій вона здатна виявити і які основні правила здачі ПЛР?

Що таке ПЛР?

У 20 столітті Кері Мюлисом (Kary Mullis) було введено нове поняття полімеразної ланцюгової реакції. У 1993 році він отримав премію Нобеля з хімії за своє відкриття. Методика чимось схожа на імуноферментний аналіз.

У ЦПР та ІФА одне завдання — виявити причини патологій внаслідок проникнення вірусів. При цьому в порівнянні ЦПР має цілий ряд вагомих переваг.

Чому це дослідження ефективніше?

  1. Висока специфічність. Вона забезпечена тим, що у всіх досліджуваних матеріалах є унікальні для кожного збудника фрагменти ДНК. Вона задається нуклеїнової низкою праймерів, тому це виключає отримання помилкових результатів, які можуть бути виявлені при використанні імунологічних методик дослідження (помилки в них виникають з-за перехресно-реагуючих генів).
  2. Пряме виявлення збудників. Більшість традиційних методик виявляють білки-праймери, які є продуктами діяльності інфекційних агентів. Це дає дуже посереднє і ненадійне свідоцтво інфекції. ЦПР виявляє унікальні ДНК-фрагменти збудника.
  3. Висока швидкість одержання підсумків аналізу. При ЦПР не потрібно штучно вирощувати і виділяти збудник — це економить багато часу. Аналіз проводиться протягом 5 годин завдяки методикам обробки матеріалу і детекції продуктів, а так само автоматизації процесів ампліфікації.
  4. Сильна чутливість. ПЛР виявляє навіть поодинокі клітини вірусів і бактерій. Його чутливість становить 10-100 клітин на пробу. Для порівняння: чутливість микроскопичных та імунологічних тестів — близько 105 клітин).
  5. Універсальність до всіх типів збудників. Методика заснована на виявленні ДНК і РНК фрагментів, які для всіх організмів специфічні. Всі нуклеїнові кислоти схожі, тому можна застосовувати уніфіковані типи аналізів. При ПЛР можна в одній пробі відразу виявити кілька збудників захворювань.
  6. Виявляє гострі і хронічні інфекції. Він дуже ефективний у ситуації у виявленні некультивованих, важко культивованих і персистуючих мікроорганізмів (вони дуже часто є причинами хронічних інфекцій), тому що вирощувати ці культури просто немає необхідності. ПЛР ефективний для діагностики высоанитигенноизменчивых збудників і внутрішньоклітинних паразитів.
За темою:  Білірубін у крові

Суть методики полягає у виявленні генетичних ділянок чужого геному. Після того як фрагмент нуклеїнової кислоти, після чого він копіюється (кодується).

Потім відбувається реплікація цих ділянок ДНК, тому що для подальшого процесу потрібно більше таких мікроділянок. Розмноження — це невід’ємне і природна властивість нуклеїнової кислоти.

Вона буде правильно під впливом полімерази (фермент), навіть не перебуваючи всередині мікроорганізму. Піде ланцюгова реакція і таких клонів утворюється велика кількість.

Фрагментів скопіюється багато, але це будуть саме ті, які потрібні досліднику. Взятий матеріал повинен бути повністю чистим.

Тому якщо в людському організмі буде знаходиться навіть не цілий вірус, а його фрагменти, реакція порушиться або збільшується структура ланцюжка. Це і покаже наявність чужорідного організму, реакція буде позитивною.

В кожній лабораторії є база даних. У ній вказується точна будова геномів кожного відомого інфекційного агента. ПЛР дозволяє не тільки виявити збудника, але і відстежити його кількісне співвідношення.

Типи аналізу

  1. Стандартний. Метод його проведення могли вивчити вище.
  2. ПЛР в режимі реального часу. Процес виявлення конкретного ДНК-фрагмента запускається після здійснення кожного циклу. Не використовується вся ланцюжок з 30-40 циклами. Ця методика підходить для кількісного аналізу.
  3. Режим зворотної транскрипції (ЗТ-ПЛР). Знаходить фрагменти РНК з одним ланцюжком. Використовується для вірусів, що РНК-генетичною базою. При цій методиці використовується зворотна транскриптаза і конкретний праймер. На базі РНК будується ДНК з одним ланцюжком. Потім ця ланцюжок доповнюється другий і потім виконується звичайна процедура аналізу.

Сфери використання ПЛР

Цей діагностичний метод представляє деякі нововведення в сфері лабораторної діагностики.

  • визначення батьківства;
  • введення мутацій;
  • зчленування окремих фрагментів РНК і ДНК;
  • визначення чутливості до різних типажів антибіотиків.

Він активно використовується в різних галузях медицини:

  • гінекологія;
  • онкологічна;
  • пульмонологічна;
  • гастроентерологічна;
  • фтизіатрична та інші сфери медицини.

Реакція ПЛР використовується не тільки в медичній сфері. Вона дуже допомагає:

  1. у судово-медичних експертизах, коли практично не залишається матеріалів для ДНК-дослідження;
  2. у ветеринарній медицині;
  3. молекулярної генетики, фармакології та біології;
  4. ідентифікації особистості людини за ДНК;
  5. контролювати поширення епідемій серед диких і домашніх тварин;
  6. у палеонтології — для вивчення скам’янілостей і генетичних особливостей стародавніх тварин і рослин;
  7. антропології — для вивчення людей і всього, що з ними пов’язано;
  8. екології — при відстеженні факторів навколишнього середовища, дослідження якості продуктів харчування;
  9. епідеміологія — відстеження нових видів мікробів і підвиди патогенів, які викликали попередні епідемії.
За темою:  Аналіз ПСА що це таке?

Які матеріали підійдуть для аналізу?

Що б провести діагностику ПЛР-методикою, можна взяти такі типи біоматеріалу:

  1. Зішкріб епітелію з різних слизових оболонок — найчастіше береться для діагностики ІПСШ та інших інфекцій, які можуть вражати слизові оболонки.
  2. Мокрота — підходить для виявлення распіраторних форм мікоплазмозу та хламідіозу, туберкульозу. Для дослідження береться близько 20 мл мокротиння, матеріал поміщається в стерильну баночку.
  3. Біоптати — використовуються для виявлення хелікобактерної інфекції. Беруться в основному біоптати дванадцятипалої кишки і шлунка.
  4. Сироватка крові і плазма — підходить для аналізу різних видів гепатиту і дослідження людських генів.
  5. Сеча — застосовується для діагностики захворювань органів сечостатевої системи у жінок та чоловіків ( у чоловіків для діагностики цих захворювань замість сечі можуть взяти зішкріб).
  6. Біологічні рідини — це бронхоальвеолярный лаваж, сік простати, суглобова/навколоплідна/спинномозкова/плевральної рідини, слина.

Виявляються інфекції

Як вже говорилося, одна з базових переваг ПЛР — це сприйнятливість до різних типів інфекцій. З допомогою цього аналізу можна виявити:

  • ЗПСШ: трихомоніаз, хламідіоз, уреаплазмоз, мікоплазмоз, гарднерельоз, генітальний герпес;
  • ВПЛ, онкогенні його підвиди;
  • ВПЛ;
  • 1 і 2 типи герпесу;
  • збудник інфекційного мононуклеозу;
  • цитомегаловірус;
  • вірус Епштейн-Барра;
  • гепатити А, В, С, G;
  • мікобактерії туберкульозу;
  • лістеріоз;
  • бореліоз;
  • кліщовий енцефаліт;
  • кандидозна інфекція;
  • інфекція хелікобактер пілорі.

І це далеко не всі віруси, які може виявити даною методикою.

ПЛР є дуже ефективним для дослідження генів майбутніх мами і батька. У них ПЛР виявляє всі генетичні патології, які можуть передатися дитині. У новонароджених і дорослих дітей він знаходить і підтверджує хвороби, які могли йому передатися по спадку.

Так само дослідження виявляє:

  • патології плоду в утробі мами на ранніх термінах вагітності;
  • визначає сумісність тканин при донорство органів;
  • патогени в крові донорів;
  • приховані інфекції у новонароджених.
За темою:  Аналізи на паразитів

Як правильно здавати?

Є певні правила, яких потрібно дотримуватися перед здачею аналізу. Якщо проводиться аналіз на наявність статевої інфекції:

  • якщо береться проба з уретри через 4 години виключаються походи в туалет;
  • уникати статевих актів мінімум за 72 години до дослідження;
  • ввечері за день до дослідження гігієну інтимної зони;
  • за три доби не використовувати свічки та інші препарати для вагінальної області.

Інші правила для отримання максимально точних результатів:

  1. обов’язково за місяць до проведення дослідження виключається прийом антибіотиків;
  2. кров здається тільки натщесерце, пити попередньо теж не можна;
  3. якщо на ПЛР здається сеча — робиться це вранці і після туалету статевих органів, збирається сеча в стерильний контейнер.

Підсумок аналізу

Найчастіше результати оголошуються вже на наступну добу. Може бути дві реакції:

  1. Негативна — означає, що в зданим біологічному матеріалі не виявили не виявили ніяких збудників інфекцій.
  2. Позитивний — з практично 100% точністю знаходяться патогенні мікроорганізми.

Буває таке, що реакція позитивна, але при цьому симптомів зараження інфекцією не виявляється. Подібне явище медики називають «здоровим носійство».

Воно найчастіше спостерігається при дослідженні біоматеріалу з порожнини рота, уретри або цервікального каналу. У такій ситуації пацієнт не вимагає особливого лікування, але при цьому потрібно постійно обстежитися у лікаря.

Це обґрунтовано тим, що існує ймовірність активізації вірусу і переходу захворювання в хронічну форму, а так само про можливе підхваті хвороби або про потенційного зараженні інших здорових людей.

ПЛР — нове слово в лабораторних дослідженнях. Вона застосовується в різних сферах і напрямках медицини. Це одна з найкращих і надійних методик виявлення хвороб.